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ROTI®Lumin, 2 x 120 ml

10x conc., sans fluorescence, pour les protéines et la cytoimmunochimie
Icon_ready-to-use Produits et réactifs prêts à l’emploi
Cdt.
Cdt.
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Substrat HRP
Temp. de stockage : +4 °C

Substrat de chimiluminescence pour les réactions de détection par la peroxydase.
2 x 120 ml sont suffisants pour env. 3 500 cm2 de membrane (env. 50 transferts de mini-gel) soit 2 400 puits dans l’ELISA.

289,20 €/cdt. 

TVA en sus. | 1 kit par cdt.

Réf. P078.1

En stock
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à partir de 6 cdt. 274,74 €/cdt.
à partir de 24 cdt. 260,28 €/cdt.
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Données du produit


  • Sensible et fiable
  • Pour tous les types de membranes usuels
  • Faible bruit de fond
  • Évite la fastidieuse préparation d’un tampon peroxydase
  • Adapté aux strippings et hybridations répétitifs

ROTI®Lumin est un kit de chimiluminescence pour les molécules reporter couplées peroxydase (par ex. HRP-anticorps), telles qu’elles sont utilisées, entre autres, en Western blot. Par rapport aux substrats chromogènes, ROTI®Lumin présente une sensibilité accrue et réduit le bruit de fond.


Mécanisme

en présence de peroxyde d’hydrogène, ROTI®Lumin est converti par l'HRP en un dianion excité. Lors du retour du dianion à son état fondamental, il y a émission de lumière. L'émission lumineuse de ROTI®Lumin atteint le maximum en 5 minutes et reste à ce plateau maximal pendant env. 1 à 2 heures.



ROTI®Lumin 10x conc., sans fluorescence, pour les protéines et la cytoimmunochimie
Conseils d'utilisation

ROTI®Lumin est composé de deux solutions qui, avant utilisation, sont à mélanger dans un rapport 1:1. Il peut être utilisé sur membranes nitrocellulose, nylon et PVDF. Des résultats optimaux sont obtenus en combinaison avec Immobilon-PVDF ou ROTI®PVDF.
Les domaines d’utilisation typiques sont : Western blot, ELISA, Southern blot, Dot blotting et hybridations sur colonies. Les anticorps, qui adhèrent à la membrane, peuvent être facilement déplacés avec le tampon Roti®-Free Stripping, permettant ainsi une réutilisation de la membrane pour des réactions de mise en évidence.

RotiLumine_Sensitivitaet
Figure : Sensibilité de la ROTI®Lumine.
la sensibilité de ROTI®Lumin ultra se situe dans la partie basse du domaine du femtogramme. Mise en évidence d'un anticorps polyclonal (de g. à d. 4 pg, 400 fg, 40 fg, 4 fg) sur ROTI®PVDF (réf. T830.1). Mise en évidence dans le PBST moyennant un anticorps anti-lapin couplé HRP (1:2000).
a/A: ROTI®Lumin ultra ; b/B: ROTI®Lumin plus ; c/C: ROTI®Lumin ; d/D: produit concurrent pour le domaine du femtogramme. a/b/c/d : temps d'exposition 10 secondes, A/B/C/D : temps d'exposition de 1 minute.
3692_Diagramm_Lichtemission30min
Figure :
déroulement typique de la luminescence du groupe ROTI®Lumin: 0-30 min après mélange et vaporisation. Compétiteur P : produit concurrent pour le domaine du femtogramme.

Le kit contient

120 ml (25 ml) de Roti®-Lumin 1 (réf. P079) et de 120 ml (25 ml) de ROTI®Lumin 2 (réf. P080).
Les composants unitaires de ce kit ne peuvent pas être achetés séparément.

3692_Diagramm_LichtemissionB
Figure :
sensibilité relative des ROTI®Lumins. Mesure de l’émission lumineuse relative après la réaction ECL moyennant HRP dissoute (50 fg).
Compétiteur P : produit concurrent pour le domaine du femtogramme.
3692_Diagramm_Lichtemission5min
Figure :
déroulement typique de la luminescence du groupe ROTI®Lumin : 0-5 min. après mélange et vaporisation. Compétiteur P : produit concurrent pour le domaine du femtogramme.


Informations techniques
Application Western, in situ, Histochimie  
Enzyme Peroxydase du raifort  
Mise en évidence chimioluminescent  
Produit signal Précipiter (Blot)  
Utilisation Western  
ROTI®Lumin
Quantité sélectionnée :   0
  1. Somme intermédiaire :  0.00
Réf. Cdt. Cdt. Cdt. Prix Quantité
P078.1 1 kit plastique 2 x 120 ml 289,20 €
P078.2 1 kit plastique 2 x 25 ml 81,60 €
En stock
Disponible à court terme
Non disponible
Date de livraison inconnue à l'heure actuelle
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Téléchargements

Informations générales

Protocole d’essai pour l’utilisation du BCIP sel de p-toluidine/NBT lors des procédures dimmunotransfert :

Solutions mères (stable un an, si conservée à 4 °C) :
0,5 g de NBT dans 10 ml de diméthylformamide à 70 %.
0,5 g de BCIP-sel de p-toluidine dans 10 ml de diméthylformamide à 100 %.
Tampon d’incubation pour la phosphatase alcaline :
100 mM de NaCl, 5 mM de MgCl2, 100 mM de TRIS (pH 9,5).
Solution de substrat fraîche : 66 μl de solution mère NBT + 10 ml de tampon d’incubation, bien mélanger, ajouter 33 μl de solution mère BCIP. Utiliser en l’espace d'une heure.
Développement de blot : Env. 10 ml de solution de substrat par surface de membrane de 15 x 15 cm2. Développement à température ambiante, jusqu’à ce que les bandes deviennent visibles (30 min. environ).
Arrêt de réaction : rincer avec PBS/EDTA 20 mM.


Préparation pour la mise en évidence de l'activité de la peroxydase (immunodosage) :

Dissoudre 1 mg de TMB dans 0,1 ml de diméthylsulfoxyde (réf. 4720). Ajouter 9,9 ml d’une solution d’acétate de sodium 0,1 M (pH 6,0) (poudre : réf. 6779), filtrer et ajouter H2O2 (réf. 8070) (concentration finale 0,01 %).

Utiliser toujours des solutions de travail fraîchement préparées !

Incubation pendant 10 à 30 minutes à température ambiante (env. 50 μl par puits de microtitration ; ajouter ensuite 50 μl de H2SO4 1 M, réf. X873 par puits).
Quantification photométrique à 450 nm.

Référence bibliographique : Bos E.S. et al. (1981) J. Immunoassay 2, (3/4), 187.


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