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X-β-Gal, 5 g

≥99 %, BioScience Grade
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Cdt.
Emb.
5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactoside
Formule brute C14H15BrClNO6
Masse moléculaire (M) 408,6 g/mol
Point de fusion 230 °C
Temp. de stockage : -20 °C
Temp. de transport: temp. ambiante
WGK 1
Nr. CAS[7240-90-6]
EG-Nr. 230-640-8

Substrat colorimétrique de la β-galactosidase. Pour la biochimie et la biologie moléculaire.
Solution mère : 100 mg/ml (240 mM) dans le DMF, conserver à l’obscurité à -20 °C

Pour la mise en évidence colorimétrique de l’activité β-galactosidase, comme par ex. lors de la séle ...
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Données du produit



X-β-Gal ≥99 %, BioScience Grade

Pour la mise en évidence colorimétrique de l’activité β-galactosidase, comme par ex. lors de la sélection blanc/bleu.


Mécanisme

L'IPTG inhibe en tant que galactopyranoside le répresseur lac et entraîne par là même une induction du promoteur lac. Sur le plasmide est ensuite exprimée l'extrémité C-terminale, longue de près de 146 acides aminés, d'une β-galactosidase, qui complémente en tant qu'alpha-donneur la β-galactosidase délétée à extrémité C-terminale de la souche bactérienne. La β-galactosidase fonctionnelle scinde le galactoside X-Gal, générant une couleur bleue - ces clones lac+ sont bleu foncé. Du fait que l'extrémité C-terminale de l'alpha-donneur est codée avant, et son extrémité N-terminale est codée après le site de clonage du plasmide, l'insertion d'un ADN étranger entraîne généralement un décalage de cadre de lecture ou tout au moins une forte élongation de la chaîne, de sorte qu'il ne peut y avoir aucun alpha-donneur fonctionnel, et donc aucune galactosidase fonctionnelle - les clones recombinants restent blancs. Des clones bleu clair apparaissent, soit parce que les insertions sont très courtes, soit parce que souvent l'extrémité C-terminale de l'alpha-donneur suffit pour une fonction rudimentaire, de sorte que dans les clones recombinants aussi, le X-Gal est scindé dans une faible mesure.


Conseils d’utilisation

Solution mère : 100 mg/ml (240 mM) dans le DMF, conserver à l’obscurité à -20 °C.
Concentration de travail : pour la sélection bleu/ blanc de clones recombinants sur plaques de gélose, utiliser env. env. 0,3 μl de solution mère par ml de milieu/agar.



Informations techniques
Enzyme β-D-Galactosidase 
Produit signal Précipiter (sélection bleu/blanc) 
X-β-Gal
Quantité sélectionnée :   0
  1. Somme intermédiaire :  0.00
Réf. Cdt. Emb. Prix Quantité
2315.1 100 mg verre 22,30 CHF
2315.2 500 mg verre 64,95 CHF
2315.3 1 g verre 121,10 CHF
2315.4 5 g verre 408,65 CHF
2315.5 2,5 g verre 301,00 CHF
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Disponible à court terme
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Date de livraison inconnue à l'heure actuelle
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Informations générales

Protocole d’essai pour l’utilisation du BCIP sel de p-toluidine/NBT lors des procédures dimmunotransfert :

Solutions mères (stable un an, si conservée à 4 °C) :
0,5 g de NBT dans 10 ml de diméthylformamide à 70 %.
0,5 g de BCIP-sel de p-toluidine dans 10 ml de diméthylformamide à 100 %.
Tampon d’incubation pour la phosphatase alcaline :
100 mM de NaCl, 5 mM de MgCl2, 100 mM de TRIS (pH 9,5).
Solution de substrat fraîche : 66 μl de solution mère NBT + 10 ml de tampon d’incubation, bien mélanger, ajouter 33 μl de solution mère BCIP. Utiliser en l’espace d'une heure.
Développement de blot : Env. 10 ml de solution de substrat par surface de membrane de 15 x 15 cm2. Développement à température ambiante, jusqu’à ce que les bandes deviennent visibles (30 min. environ).
Arrêt de réaction : rincer avec PBS/EDTA 20 mM.


Préparation pour la mise en évidence de l'activité de la peroxydase (immunodosage) :

Dissoudre 1 mg de TMB dans 0,1 ml de diméthylsulfoxyde (réf. 4720). Ajouter 9,9 ml d’une solution d’acétate de sodium 0,1 M (pH 6,0) (poudre : réf. 6779), filtrer et ajouter H2O2 (réf. 8070) (concentration finale 0,01 %).

Utiliser toujours des solutions de travail fraîchement préparées !

Incubation pendant 10 à 30 minutes à température ambiante (env. 50 μl par puits de microtitration ; ajouter ensuite 50 μl de H2SO4 1 M, réf. X873 par puits).
Quantification photométrique à 450 nm.

Référence bibliographique : Bos E.S. et al. (1981) J. Immunoassay 2, (3/4), 187.


Certificats d'analyse

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Les certificats d'analyse suivants ont été trouvés :

Analyse garantie

Aspectpoudre blanche à presque blanche  
Teneur (HPLC)≥99 %  
Rotation spécifique [α]a (c=1 dans DMF/H2O 1:1)-62° ±2°  
Eau (KF)≤0,2 %  
DNases, RNases, Protéasesnone detected  

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