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3,3',5,5'-Tétraméthylbenzidine dichlorhydrate, 1 g

≥99 %, pour la biochimie
Cdt.
Emb.
TMB · 2 HCl, TMB dichlorhydrate
Formule brute C16H20N2 · 2 HCl
Masse moléculaire (M) 313,27 g/mol
Point de fusion 300 °C
Temp. de stockage : -20 °C
WGK 1
Nr. CAS[207738-08-7]
EG-Nr. 264-769-6

Substrat de la peroxydase. Soluble dans l’eau.
Solution mère : 0,1 mg/ml dans l’acide acétique à 50 % ou un tampon phosphate citrate (NaH2PO4 50 mM, acide citrique 25 mM, pH 5,0). Pour solubiliser, chauffer à 45 °C et soumettre à sonication. Incolore.

Stockage de la solution mère : récipient bien fermé à +4 °C. L’oxydation se traduit par une légère coloration bleue.

Solution de travail : directement avant utilisation, ajouter 2 µl / 10 ml de peroxyde d’hydrogène 30 %.

(Liem et al. (1979) Anal Biochem, 98:388-93).

Le dichlorhydrate de tétraméthylbenzidine est utilisé comme substrat hautement sensible pour la déte ...
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3,3',5,5'-Tétraméthylbenzidine dichlorhydrate ≥99 %, pour la biochimie

Le dichlorhydrate de tétraméthylbenzidine est utilisé comme substrat hautement sensible pour la détection de sondes marquées à la peroxydase de raifort (HRP). Il est surtout utilisé pour les essais en solution comme le test ELISA. La conversion du substrat produit un colorant soluble bleu qui peut être mis en évidence par spectrophotométrie. Le dichlorhydrate est facilement soluble dans l'eau et simple d'emploi en laboratoire.



Informations techniques
Enzyme Peroxydase du raifort 
Mise en évidence Couleur (bleu) 
Produit signal soluble (ELISA) 
3,3',5,5'-Tétraméthylbenzidine dichlorhydrate
Quantité sélectionnée :   0
  1. Somme intermédiaire :  0.00
Réf. Cdt. Emb. Prix Quantité
4107.1 500 mg verre 53,10 CHF
4107.2 1 g verre 86,70 CHF
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Informations générales

Protocole d’essai pour l’utilisation du BCIP sel de p-toluidine/NBT lors des procédures dimmunotransfert :

Solutions mères (stable un an, si conservée à 4 °C) :
0,5 g de NBT dans 10 ml de diméthylformamide à 70 %.
0,5 g de BCIP-sel de p-toluidine dans 10 ml de diméthylformamide à 100 %.
Tampon d’incubation pour la phosphatase alcaline :
100 mM de NaCl, 5 mM de MgCl2, 100 mM de TRIS (pH 9,5).
Solution de substrat fraîche : 66 μl de solution mère NBT + 10 ml de tampon d’incubation, bien mélanger, ajouter 33 μl de solution mère BCIP. Utiliser en l’espace d'une heure.
Développement de blot : Env. 10 ml de solution de substrat par surface de membrane de 15 x 15 cm2. Développement à température ambiante, jusqu’à ce que les bandes deviennent visibles (30 min. environ).
Arrêt de réaction : rincer avec PBS/EDTA 20 mM.


Préparation pour la mise en évidence de l'activité de la peroxydase (immunodosage) :

Dissoudre 1 mg de TMB dans 0,1 ml de diméthylsulfoxyde (réf. 4720). Ajouter 9,9 ml d’une solution d’acétate de sodium 0,1 M (pH 6,0) (poudre : réf. 6779), filtrer et ajouter H2O2 (réf. 8070) (concentration finale 0,01 %).

Utiliser toujours des solutions de travail fraîchement préparées !

Incubation pendant 10 à 30 minutes à température ambiante (env. 50 μl par puits de microtitration ; ajouter ensuite 50 μl de H2SO4 1 M, réf. X873 par puits).
Quantification photométrique à 450 nm.

Référence bibliographique : Bos E.S. et al. (1981) J. Immunoassay 2, (3/4), 187.


Certificats d'analyse

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Solution (1 % dans le méthanol)colourless to yellow-green  
Eau (KF)≤5 %  
Cendres sulfatées≤0,1 %  

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