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ROTI®Lumin plus, 2 x 20 ml in Sprühflaschen

ready-to-use, für die Protein- und Cytoimmunchemie
Icon_ready-to-use Gebrauchsfertige Produkte und Reagenzien
Icon_Eisstern Die so gekennzeichneten, besonders temperaturempfindlichen Produkte werden in speziellen Kühlboxen auf Kühlakkus oder in Trockeneis verschickt.
VE
Verp.
Abpackung
HRP-Substrat
Lagertemp.: +4 °C
Transporttemp.: gekühlt

Hocheffizientes Chemolumineszenz-Substrat für HRP-vermittelte Western-Blot-Detektionen.
2 x 100 ml sind ausreichend für ca. 10.000 cm2 Membran (ca. 150 Minigel-Blots).

Typanalyse

125,50 €/VE 

zzgl. MwSt. | 1 Kit pro VE

Best.-Nr. 3692.1

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In den allgemeinen Informationen bzw. Produktdetails haben wir zu jedem Produkt umfangreiche Beschreibungen und Downloads zusammengestellt.

Wenn Sie auch im Analysenzertifikat und den Anwendungsbeispielen keine Antwort auf Ihre Frage finden können, nehmen Sie gerne Kontakt zu uns auf!
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Produktdetails


  • Sehr einfach anzuwenden
  • Zum Aufsprühen oder Pipettieren
  • Optimierte Signalstärke für Detektionen im oberen Femtogrammbereich
  • Optimal für mittlere und lange Expositionszeiten
  • Geeignet für NC-Membranen, optimal für PVDF-Membranen

Effizientes Western-Blot Substrat auf Luminolbasis, zum chemolumineszenten Nachweis von Meerrettichperoxidase (HRP) auf Membranen. Die optimierte Zusammensetzung ergibt eine hohe Signalstärke in sehr stabilem Niveau über mehr als 30 Minuten.

Durch die praktischen Sprühflaschen ist ein vorheriges, zeitaufwändiges Mischen nicht notwendig - Substrat-Lösung 1 und Verstärker-Lösung 2 werden einfach auf die Membranen gesprüht. Die Spraytechnik garantiert dabei eine äußerst feine und gleichmäßige Verteilung des Substrates auf der Membranfläche, so dass Artefakte durch ungleiche Verteilung des aufpipettierten Substrates vermieden werden. Durch die hohe Signalstärke können bei reduzierter Antikörperkonzentration Proteine im oberen Femtogrammbereich detektiert werden.

  • Einsprühen der Membran mit Lösung 1
  • Sofort anschließend Einsprühen der Membran mit Lösung 2
  • Inkubation ca. 1 min (Einschließen der Membran in Folie etc.)
  • Exposition

In Gegenwart von Wasserstoffperoxid wird ROTI®Lumin von der HRP zu einem angeregten Dianion umgesetzt. Bei der Rückkehr des Dianions in den Grundzustand wird Licht frei. Die Lichtemission von ROTI®Lumin erreicht innerhalb von 5 Minuten das Maximum und bleibt auf Maximal-Plateau für ca. 1-2 Stunden.



ROTI®Lumin plus ready-to-use, für die Protein- und Cytoimmunchemie
Anwendungshinweise

Für einen Mini-Blot von 7 × 8 cm Größe sind 3-4 Pumpstöße notwendig.
Sollen bestehende Protokolle verwendet werden, können die Sprühflaschen auch einfach aufgeschraubt und die Lösungen pipettiert werden.
Für mittlere und lange Expositionszeiten empfehlen wir die Verwendung von ROTI®Lumin plus.

3692_Diagramm_LichtemissionB
Abbildung:
Relative Sensitivität der ROTI®Lumine. Messung der relativen Lichtemission nach ECL-Reaktion mittels gelöster HRP (50 fg).
Kompetitor P: Mitanbieter-Produkt für den Femtogramm-Bereich.
3692_Diagramm_Lichtemission30min
Abbildung:
Typischer Lumineszenzverlauf der ROTI®Lumin-Gruppe: 0-30 min nach Mischen/Spray. Kompetitor P: Mitanbieter-Produkt für den Femtogramm-Bereich.

Der Kit enthält

20 ml (100 ml) Lösung 1 (Best.-Nr. 3936) und 20 ml (100 ml) Lösung 2 (Best.-Nr. 3937) in Sprayflaschen bzw. aus 250 ml Lösung 1 (Best.-Nr. 3936) und 250 ml Lösung 2 (Best.-Nr. 3937) in Nachfüllflaschen.
Die Einzelbestandteile dieses Kits können nicht separat nachgekauft werden.

3692_RotiLuminPlus_Membranvergleich
Abbildung:
ROTI®Lumin plus ist optimal an die ROTI®PVDF Membran angepasst (C). Nachweis eines polyklonalen Antikörpers (v.l.n.r. 4 pg, 400 fg, 40 fg, 4 fg). Nachweis in PBST über einen HRP-gekoppelten anti-Rabbit Antikörper (1:2000). Expositionszeit 1 min.

A: ROTI®Nylon (Best.-Nr. AE50.1);
B: ROTI®NC (Best.-Nr. HP40.1);
C: ROTI®PVDF (Best.-Nr. T830.1).
3692_Diagramm_Lichtemission5min
Abbildung:
Typischer Lumineszenzverlauf der ROTI®Lumin-Gruppe: 0-5 min. nach Mischen/Spray. Kompetitor P: Mitanbieter-Produkt für den Femtogramm-Bereich.

RotiLumine_Sensitivitaet
Abbildung: Sensitivität der ROTI®Lumine.
Die Sensitivität von ROTI®Lumin ultra liegt im unteren Femtogrammbereich. Nachweis eines polyklonalen Antikörpers (v.l.n.r. 4 pg, 400 fg, 40 fg, 4 fg) auf ROTI®PVDF (Best.-Nr. T830.1). Nachweis in PBST über einen HRP-gekoppelten anti-Rabbit Antikörper (1:2000).
a/A: ROTI®Lumin ultra; b/B: ROTI®Lumin plus; c/C: ROTI®Lumin; d/D: Mitanbieter-Produkt für den Femtogramm-Bereich. a/b/c/d: 10 sek. Expositionszeit, A/B/C/D: 1 min. Expositionszeit.


Technische Informationen
Enzym Meerrettich-Peroxidase  
Nachweis chemolumineszent  
Signalprodukt Präzipitat (Blot)  
ROTI®Lumin plus
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3692.1 1 Kit Kunst. 2 x 20 ml in Sprühflaschen 125,50 €
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Allgemeine Informationen

Versuchsprotokoll zur Anwendung von BCIP-p-Toluidinsalz/NBT bei Immunoblot-Verfahren:

Stammlösungen (Stabilität bei +4 °C ein Jahr):
0,5 g NBT in 10 ml 70 % Dimethylformamid.
0,5 g BCIP-p-Toluidinsalz in 10 ml 100 % Dimethylformamid.
Inkubationspuffer für die Alkalische Phosphatase:
100 mM NaCl, 5 mM MgCl2, 100 mM TRIS (pH 9,5).
Frische Substratlösung: 66 μl der NBT-Stammlösung + 10 ml des Inkubationspuffers, gut mischen, 33 μl BCIP Stammlösung hinzufügen. Innerhalb einer Stunde verbrauchen.
Blot-Entwicklung: Ca. 10 ml der Substratlösung pro 15 x 15 cm2 Membranoberfläche. Entwicklung bei Raumtemperatur, bis Banden sichtbar werden (ca. 30 min).
Reaktions-Stopp: Mit PBS/20 mM EDTA spülen.


Ansatz für den Nachweis der Peroxidase-Aktivität (Immunoassay):

1 mg TMB in 0,1 ml Dimethylsulfoxid (Best.-Nr. 4720) auflösen. 9,9 ml einer 0,1 M Natriumacetat-Lösung (pH 6,0) (Pulver: Best.-Nr. 6779) hinzufügen, filtern und H2O2 (Best.-Nr. 8070) (Endkonzentration 0,01 %) zugeben.

Immer frisch ansetzen!

Inkubation 10-30 min bei Raumtemperatur (ca. 50 μl pro Mikrotiterwell; anschließend Zugabe von 50 μl 1 M H2SO4, Best.-Nr. X873, pro Well).
Photometrische Quantifizierung bei 450 nm.

Literaturhinweis: Bos E.S. et al. (1981) J. Immunoassay 2, (3/4), 187.


Analysenzertifikate

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Es wurden die folgenden Analysezertifikate gefunden:

Typanalyse

Lösung 1farblos bis gelblich, klar  
Lösung 2farblos  
Lichtemission nach 5 und 30 Minuten (RLU)entspricht  

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