ClickTech EdU Cell Proliferation Kit 555

Die Zahl am Ende des Produktnamens dieser Kits gibt die Wellenlänge an bei welcher der im Kit enthaltene Fluoreszenzfarbstoff angeregt werden kann. Als Anregungsquellen können dabei verschiedene Laser dienen:

Die ClickTech EdU Cell Proliferation Kits für die EdU-vermittelte Detektion der Zellproliferation stellen eine überlegene Alternative für die zeitintensiven und weniger sensitiven BrdU-Assays dar. Ähnlich wie bei BrdU-Assays wird bei diesen Assays ein Uracil-Derivat (in diesem Fall Ethinyldesoxyuridin, kurz EdU) in die sich replizierende DNA eingebaut. Zum Nachweis der EdU Moleküle dienen keine Antikörper, stattdessen wird über eine Click-Reaktion direkt ein Fluoreszenzfarbstoff angebunden. Dieser schnelle und elegante Ansatz ermöglicht das direkte Markieren der replizierten DNA mit dem jeweils gewünschten Fluoreszenzfarbstoff, wodurch der Nachweis perfekt an die Mikroskopausstattung oder Assay-Situation (z.B. bei Doppel- oder Tripelnachweisen) angepasst werden kann. Weiterhin ist die Reaktion hochselektiv, weswegen praktisch keine unspezifische Markierung auftritt. Das Protokoll umfasst nur wenige Arbeitsschritte und verringert signifikant die Gesamtarbeitszeit.

Für folgende Anwendungen sind Kits erhältlich:

▶ Kits für die Zellproliferation: • T-Zell Proliferation (ClickTech EdU T Cell Proliferation Kit - Flow Cytometry) • Fluoreszenzmikroskopie (ClickTech EdU Cell Proliferation Kit - Imaging) • High Throughput Screening (ClickTech EdU Cell Proliferation Kit - HTS) • Durchflusszytometrie (ClickTech EdU Cell Proliferation Kit - Flow Cytometry)▶ Kits für die Nukleinsäuremodifikation • PCR-Modifizierungs Kit • DNA FISH Kit • RNA Labeling Kit • ClickTech Oligo Link Kit • ClickTech Library Kit - full-length mRNA Seq

Funktionsweise des Click-Assays:

Vorteile der Click-Chemie basierten Methode:

• Äußerst zuverlässig
• Einfache Handhabung
• Schnelles Nachweisverfahren (nur 30 Min.)
• Milde Bedingungen ohne DNA-Denaturierung
• Modulares System durch Click Chemie
• Kombinierbar mit vielen Farbstoffen
• Kompatibel mit Multiplexing

Die Kupfer(I)-katalysierte Azid-Alkin-Cycloaddition (CuAAC) ist das wohl bekannteste Beispiel für eine Gruppe von Reaktionen, die Sharpless als Click-Reaktionen definierte. Diese Click-Reaktionen zeichnen sich besonders durch ihre hohen Ausbeuten, milden Reaktionsbedingungen und durch ihre Toleranz gegenüber einer Vielzahl an funktionellen Gruppen aus.^[1-3] In der Regel erfordern derartige Reaktionen eine einfache oder gar keine Aufarbeitung beziehungsweise Reinigung des Produkts. Die wichtigste Eigenschaft der CuAAC ist ihre einzigartige Bioorthogonalität, da in der Regel weder Azid noch Alkin als funktionelle Gruppe in natürlichen Systemen vorkommt.

Referenzen:
1 H. C. Kolb, M.G. Finn, K. B. Sharpless, Angew. Chem. Int. Ed. 2001, 40, 2004-2021.
2 C.W. Tornoe, C. Christensen, M. Meldal, J. Org. Chem. 2002, 67, 3057-3064.
3 V. V. Rostovtsev, L. G. Green, V. V. Fokin, K. B. Sharpless, Angew. Chem. 2002, 114, 2708-2711; Angew. Chem. Int. Ed. 2002, 41, 2596-2599.

In den letzten Jahren erlangte die Click-Chemie eine immer größere Bedeutung und stetig wachsende Beliebtheit in der Forschung und Entwicklung. Gründe dafür sind neben der einfachen Handhabung und den hohen Ausbeuten auch die unzähligen Anwendungsmöglichkeiten. Carl ROTH bietet Ihnen die Möglichkeit das breite Portfolio an Click-Reagenzien, diversen Kits für EdU-basierte Zellproliferationsassays und zahlreiche weitere Anwendungen, von der bekannten Marke baseclick zu erwerben. Dadurch ist es uns möglich Ihnen ein, für die Click-Chemie notwendiges und umfassendes, Sortiment anzubieten.

Die Detektion der Zellproliferation ist von größter Bedeutung für die Überwachung von Zellvitalität, Genotoxizität oder zur Bestimmung und Bewertung von Krebsmedikamenten. Die Zellproliferationsassays von baseclick mit EdU (5-Ethinyl-2'-desoxyuridin) bieten eine überlegene Alternative zu den BrdU (Bromdesoxyuridin)-Assays. Die baseclick EdU Click-Assays basieren nicht auf der Verwendung von Antikörpern und benötigen daher keine DNA-Denaturierung zur Detektion der eingebauten Nukleoside. Stattdessen nutzen die EdU Click Assays die Click Chemie für den Nachweis durch verschiedene Fluoreszenzfarbstoffe. Ferner reduziert das aufgezeigte Detektionsprotokoll die Gesamtzahl der Arbeitsschritte und verringert so auch signifikant die Gesamtarbeitszeit.

Referenzen:
1 S. Vidak et al., Proliferation of progeria cells is enhanced by lamina-associated polypeptide 2α (LAP2α) through expression of extracellular matrix proteins, Genes & Development 2015, 29, 2022-2036.

EdU Click-488:
2 V. Fock et al., Trophoblast subtype-specific EGFR/ ERBB4 expression correlates with cell cycle progression and hyperplasia in complete hydatidiform moles. Human Reproduction 2015, 30, 4, 789-799.
3 K. Plessl et al., Expression pattern and function of Notch2 in different subtypes of first trimester cytotrophoblast. Placenta 2015, 36, 365-371.
4 G. Meinhardt et al., Wingless ligand 5a is a critical regulator of placental growth and survival. Scientific reports 2016, 6, 28127.
5 V. Ziegler, A. Albers, G. Fritz, Lovastatin protects keratinocytes from DNA damage-related pro-apoptotic stress responses stimulated by anticancer therapeutics. Biochimica et Biophysica Acta 2016, 1863, 1082-1092.

EdU Click-555:
6 S. Barberán, S. Fraguas and F. Cebrià, The EGFR signaling pathway controls gut progenitor differentiation during planarian regeneration and homeostasis. Development 2016, 143, 2089-2102.
7 M. Hennenberg et al., Cooperative effects of EGF, FGF, and FGF-ß1 in prostate stromal cells are different from responses to single growth factors. Life Sciences 2015, 123, 18-24.
8 D. Herrmann et al., Honokiol, a constituent of Magnolia species, inhibits adrenergic contraction of human prostate strips and induces stromal cell death. Prostate Int 2014, 2, 3, 140-146.