L'électrophorèse horizontale, ou électrophorèse en gel d'agarose, est particulièrement adaptée à la séparation des acides nucléiques. Les acides nucléiques portent une charge négative et migrent donc tous vers l'anode ; seules la taille et la structure des fragments déterminent la vitesse.
L'électrophorèse en gel d'agarose est une méthode courante pour tester un isolement d'ADNg ou d'ARN, pour détecter les produits de PCR, pour vérifier une digestion par restriction et pour purifier l'ADN en vue d'un clonage ou d'un séquençage ultérieur.
L'électrophorèse en gel d'agarose est une méthode courante pour tester un isolement d'ADNg ou d'ARN, pour détecter les produits de PCR, pour vérifier une digestion par restriction et pour purifier l'ADN en vue d'un clonage ou d'un séquençage ultérieur.
Préparation de gels d'agarose
L'agarose est un polysaccharide constitué des sucres simples D-galactose et 3,6-anhydro-L-galactose, qui sont liés par des liaisons glycosidiques. L'agarose est obtenu à partir de la paroi cellulaire des algues rouges et se caractérise notamment par son fort pouvoir gélifiant. En la faisant bouillir dans une solution tampon, généralement le tampon TAE ou TBE, la poudre d'agarose se dissout et peut ensuite être versée dans un gel. Un gel d'agarose contient généralement 0,5 à 3 % d'agarose, une concentration plus élevée signifiant que le gel a des pores plus petits et convient donc à la séparation de fragments d'acide nucléique plus petits.
Nos agaroses existent en différentes puretés, pour différentes tailles de fragments et avec différentes propriétés de gélification. Nos agaroses Low Melt sont particulièrement adaptés à l'électrophorèse préparative, car l'ADN isolé peut être récupéré très délicatement. Les tampons TAE et TBE conviennent tous deux comme tampons de gel. Le tampon TBE est particulièrement caractérisé par son pouvoir tampon et convient parfaitement à la séparation de petits fragments d'ADN. Le tampon TAE, en revanche, est mieux adapté à la séparation de grands fragments d'ADN, car il chauffe moins pendant l'électrophorèse et permet donc d'appliquer une tension plus élevée.
Cuves horizontales et accessoires
L'électrophorèse en gel d'agarose est réalisée dans une cuve horizontale. Les cuves sont marquées de différentes couleurs aux deux extrémités pour aider à connecter les câbles dans la bonne orientation. La couleur rouge représente le pôle chargé positivement, l'anode, tandis que le noir indique le pôle chargé négativement, la cathode.
Nos cuves sont fabriquées en verre acrylique robuste et sont disponibles en différentes tailles, pour de petites ou de grandes quantités d'échantillons. Elles sont livrées avec un couvercle de sécurité, un support de gel transparent aux UV et un jeu de peignes correspondant au nombre de positions du peigne. Les cuves sont faciles à utiliser et il existe un grand nombre d'accessoires et de pièces de rechange qui garantissent une grande facilité d'utilisation.
Nos cuves sont fabriquées en verre acrylique robuste et sont disponibles en différentes tailles, pour de petites ou de grandes quantités d'échantillons. Elles sont livrées avec un couvercle de sécurité, un support de gel transparent aux UV et un jeu de peignes correspondant au nombre de positions du peigne. Les cuves sont faciles à utiliser et il existe un grand nombre d'accessoires et de pièces de rechange qui garantissent une grande facilité d'utilisation.
| Réf. | 2788.1 | 2799.1 | 2850.1 | 9398.1 | 9939.1 | 2941.1 | 3000.1 | 3099.1 |
| Type | PROfessional I | PROfessional II | PROfessional III | PROfessional III Stretch 20 | PROfessional III Stretch 25 | PROfessional IV | PROfessional V | PROfessional Acetat |
| L x L Gel | 7 x 7 cm | 10 x 10 cm | 15 x 15 cm | 20 x 15 cm | 25 x 15 cm | 20 x 20 cm | 32 x 26 cm | 20 x 24 cm |
| Nombre max. d'échantillons | 32 | 80 | 210 | 280 | 350 | 500 | 672 | |
| Positions du peigne | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 10 | 12 | |
| Volume du tampon | 225 ml | 300 ml | 500 ml | 1000 ml | 1000 ml | 1200 ml | 1400 ml | |
| Dispositif L x L x H | 21 x 9 x 9 cm | 22 x 12.5 x 9 cm | 26.5 x 17.5 x 9 cm | 41 x 17.5 x 9 cm | 41 x 17.5 x 9 cm | 39.5 x 23 x 9 cm | 50 x 28 x 9 cm | 26.5 x 17.5 x 9 cm |
| Convient pour | Agarose | Agarose | Agarose | Agarose | Agarose | Agarose | Agarose | Acétat |
Migration d'acides nucléiques dans des gels d'agarose
Pour la séparation des acides nucléiques dans les gels d'agarose, il faut un tampon de marche à travers lequel le courant peut passer, un tampon de charge qui alourdit l'échantillon et marque la distance de marche, ainsi qu'un échelle d'ADN pour estimer la taille.
Notre assortiment comprend des tampons de marche TBE ou TAE, en différentes concentrations, sous forme de solution tampon ou en sachets. Le tampon TBE se distingue par sa capacité tampon élevée, mais comme il y a un risque que le tampon s'échauffe davantage pendant l'exécution, il convient de choisir une tension plus faible. Le tampon TAE, quant à lui, ne chauffe pas autant et convient mieux à la séparation de grands fragments d'ADN, car il peut être utilisé à une tension plus élevée.
Les tampons de charge et les marqueurs d'ADN existent en différentes compositions, spécialement pour le passage de petits, moyens ou grands fragments d'ADN.
Visualisation d'acides nucléiques dans des gels d'agarose
Pour détecter les acides nucléiques dans les gels d'agarose, on utilise généralement des colorants fluorescents qui s'intercalent dans l'ADN ou qui se lient à certaines structures d'ADN. La coloration peut ensuite être visualisée à l'aide d'un transilluminateur et du filtre lumineux correspondant.
Le colorant fluorescent le plus connu pour la coloration de l'ADN dans les gels d'agarose est probablement le bromure d'éthidium. Comme le bromure d'éthidium a un potentiel mutagène et est donc soupçonné de provoquer le cancer, il existe entre-temps une série d'alternatives non toxiques que l'on retrouve également dans notre assortiment.
En dehors des colorants fluorescents, notre assortiment comprend également un concentré de coloration au bleu de méthylène qui colore l'ADN de manière réversible et qui est visible en lumière blanche.
Le colorant fluorescent le plus connu pour la coloration de l'ADN dans les gels d'agarose est probablement le bromure d'éthidium. Comme le bromure d'éthidium a un potentiel mutagène et est donc soupçonné de provoquer le cancer, il existe entre-temps une série d'alternatives non toxiques que l'on retrouve également dans notre assortiment.
En dehors des colorants fluorescents, notre assortiment comprend également un concentré de coloration au bleu de méthylène qui colore l'ADN de manière réversible et qui est visible en lumière blanche.
Extraction d'acides nucléiques à partir de gels d'agarose
Pour séparer une digestion de restriction ou pour vérifier une PCR, on procède généralement à une électrophorèse sur gel d'agarose, après laquelle l'ADN séparé doit être récupéré. Pour ce faire, le morceau de gel contenant le fragment à examiner est découpé et transféré dans un récipient de réaction. L'ADN peut ensuite être purifié à l'aide de colonnes de centrifugation, de kits ou de récipients d'élution spéciaux. L'ADN purifié peut alors être utilisé pour le clonage, le séquençage ou d'autres analyses ultérieures.
Transfert d'acides nucléiques sur des membranes (Southern-Blot/Northern-Blot)
Afin d'examiner combien de copies d'un gène sont présentes dans le génome d'un organisme donné, un Southern-Blot peut être réalisé après l'électrophorèse sur gel d'agarose.
Pour le transfert des acides nucléiques, il faut une membrane appropriée, soit en nitrocellulose, soit en nylon, un tampon de transfert, des papiers de blotting pour la force capillaire et un blotter semi-sec.
Alors que le Southern blot permet de transférer et d'analyser des fragments d'ADN, le Northern blot sert à transférer l'ARN. La méthode de transfert reste toutefois la même. Notre assortiment comprend tous les appareils, tampons et réactifs dont vous avez besoin pour le transfert d'acides nucléiques sur membrane.
Pour le transfert des acides nucléiques, il faut une membrane appropriée, soit en nitrocellulose, soit en nylon, un tampon de transfert, des papiers de blotting pour la force capillaire et un blotter semi-sec.
Alors que le Southern blot permet de transférer et d'analyser des fragments d'ADN, le Northern blot sert à transférer l'ARN. La méthode de transfert reste toutefois la même. Notre assortiment comprend tous les appareils, tampons et réactifs dont vous avez besoin pour le transfert d'acides nucléiques sur membrane.
Alimentations électriques
Pour générer un champ électrique dans la cuve d'électrophorèse, une alimentation électrique est nécessaire, qui convertit le courant électrique en une tension correcte. Nos alimentations sont disponibles avec différents paramètres techniques, pour l'utilisation d'appareils de différentes tailles, ou pour la connexion de plusieurs unités. Nos blocs d'alimentation sont faciles à utiliser, sont équipés d'une minuterie avec fonction d'alarme et ont un niveau de sécurité élevé.
Assistance technique
Notre service de gestion des produits vous fournit des conseils sur les produits, les applications et les aspects scientifiques des questions techniques concernant notre gamme de Électrophorèse et vous aidera à trouver le produit le mieux adapté à votre application.e-Mail: lifescience@carlroth.de
Dr. Hacker