Zymolyase^® 100T, 100 mg

Zymolyase^®, fabriquée dans une culture submergée d’Arthrobacter luteus, possède une forte activité lytique pour les parois cellulaires des cellules vivantes d’une multitude de souches de levure. C’est la raison pour laquelle elle est souvent utilisée pour produire des protoplastes ou des sphéroplastes.

L’enzyme principal pour l’activité lytique de Zymolyase^® est β-1,3-glucane-laminaripenta-hydrolase. Cette dernière hydrolyse les polymères linéaires du glucose avec des liaisons β-1,3 et dégage comme produit principal spécifiquement le laminaripentaose.

Autres activités enzymatiques contenues : β-1,3-glucanase, protéase, mannanase. Traces de amylase, xylanase, phosphatase.

Stabilité : À 30 °C, 70 % de l’activité lytique est perdue au bout de 3 mois.

Température et pH optimale : pH 7,5 - 35 °C pour la lyse cellules vivantes de la levure, pH 6,5 - 45 °C pour l’hydrolyse du glucane de levure.

Spécificité (spectre lytique) : Ashbya, Candida, Debaryomyces, Eremothecium, Endomyces, Hansenula, Hanseniaspora, Kloeckera, Kluyveromyces, Lipomyces, Metschnikowia, Pichia, Pullularia, Torulopsis, Saccharomyces, Saccharomycopsis, Saccharomycodes, Schwanniomyces, etc.
Solution mère : Comme solution mère, il est possible de préparer une solution Zymolyase^® de 2 ou 10 % (20 ou 100 mg/ml) en fonction du système tampon ultérieur dans l’eau, 10 mM de tampon de phosphate de sodium (pH 7,4) ou 50 mM Tris-Cl (pH 7,5), avec 5 % de glucose et 50 % de glycérine. La Zymolyase^® ne se dissout pas complètement. Ne pas chauffer pour dissoudre mais utiliser la Zymolyase^® comme suspension. La suspension peut être conservée en aliquote à -20 °C.
Concentration de travail : Pour utiliser dans un système tampon correspondant, diluer à la concentration de travail d’env. 2-5 mg/ml et en option filtrer de façon stérile. Cependant la Zymolyase^® est la plupart du temps directement préparée dans le tampon de travail frais (par ex. tampon de secours 50 mM Tris-Cl, pH 7,5, 10 mM EDTA, 0,3 % β-mercaptoéthanol) dans la concentration finale avant utilisation.
Filtration stérile : Pour la filtration stérile, ne pas utiliser de filtres en nitrate de cellulose - la Zymolyase^® peut être adsorbée par les membranes en nitrate de cellulose.

1 unité activité lytique correspond à la quantité d’enzymes qui à 25 °C réduit de 30 % l’absorption à 800 nm, en utilisant 6 mg de levure de bière comme substrat dans un tampon phosphaté (pH 7,5). L’activité lytique varie en fonction de la souche de levure respective, du stade de croissance de la levure et des conditions de culture précises.

Zymolyase^® 100T est obtenue par précipitation de sulfate d’ammonium et est en plus purifiée par chromatographie d’affinité.