IPTG, 100 g, plastique

Analogue du lactose. Disaccharide glucose-galactose. Induction du promoteur lac par inhibition du répresseur lac. Recommandé pour l’induction des vecteurs d’expression et de production lac-régulés, comme par exemple la sélection bleu/blanc des recombinants E. coli.

L’IPTG inhibe en tant que galactopyranoside le répresseur lac et entraîne par là même une induction du promoteur lac. Sur le plasmide est ensuite exprimée l’extrémité C-terminale, longue de près de 146 acides aminés, d’une β-galactosidase, qui complémente en tant qu’alpha-donneur la β-galactosidase délétée à extrémité C-terminale de la souche bactérienne. La β-galactosidase fonctionnelle scinde le galactoside X-Gal, générant une couleur bleue - ces clones lac+ sont bleu foncé. Du fait que l’extrémité C-terminale de l’alpha-donneur est codée avant, et son extrémité N-terminale est codée après le site de clonage du plasmide, l’insertion d’un ADN étranger entraîne généralement un décalage de cadre de lecture ou tout au moins une forte élongation de la chaîne, de sorte qu’il ne peut y avoir aucun alpha-donneur fonctionnel, et donc aucune galactosidase fonctionnelle - les clones recombinants restent blancs. Des clones bleu clair apparaissent, soit parce que les insertions sont très courtes, soit parce que souvent l’extrémité C-terminale de l’alpha-donneur suffit pour une fonction rudimentaire, de sorte que dans les clones recombinants aussi, le X-Gal est scindé dans une faible mesure.

Solution mère : 0,5 M (1 g /8,4 ml) dans l’eau (stériliser par filtration sur filtre 0,2 µm).
Concentration finale sur plaque d’agar : 0,2 mM (adjonction après autoclavage et refroidissement du milieu).
Concentration finale dans le milieu d’induction : 2 mM.