Zymolyase^® 100T, 100 mg

Zymolyase^®, hergestellt in einer submersen Oerskovia xanthineolytica-Kultur, besitzt starke lytische Aktivität für die Zellwände lebender Zellen einer Vielfalt von Hefestämmen. Sie wird daher häufig eingesetzt, um Protoplasten oder Sphäroplasten herzustellen.

Das essentielle Enzym für die lytische Aktivität der Zymolyase^® ist die β-1,3-Glucanlaminaripentaohydrolase. Diese hydrolysiert lineare Glucosepolymere mit β-1,3-Bindungen und setzt als Hauptprodukt spezifisch die Laminaripentaose frei.

Weitere nachgewiesene Nebenaktivitäten: β-1,3-Glucanase, Protease, Mannanase; vereinzelt Spuren anderer hydrolasischer Aktivitäten (z. B. Amylase, Phosphatase).

Stabilität: Bei 30 °C gehen 70 % der lytischen Aktivität innerhalb von 3 Monaten verloren.

Temperatur- und pH-Optimum: Bei pH 7,5 - 35 °C zur Lyse lebender Hefezellens, bei pH 6,5 - 45 °C zur Hydrolyse von Hefe-Glucan.

Spezifität (lytisches Spektrum): Ashbya, Candida, Debaryomyces, Eremothecium, Endomyces, Hansenula, Hanseniaspora, Kloeckera, Kluyveromyces, Lipomyces, Metschnikowia, Pichia, Pullularia, Torulopsis, Saccharomyces, Saccharomycopsis, Saccharomycodes, Schwanniomyces, etc.
Stammlösung: Als Stammlösung kann eine 2 oder 10 %ige (20 bzw. 100 mg/ml) Zymolyase^®-Lösung je nach späterem Puffersystem in Wasser, 10 mM Natriumphosphatpuffer (pH 7,4) oder 50 mM Tris-Cl (pH 7,5), jeweils mit 5 % Glucose und 50 % Glycerin, angesetzt werden. Die Zymolyase^® löst sich nicht vollständig. Nicht erwärmen zum Lösen, sondern Zymolyase^® als Suspension verwenden. Die Suspension kann in Aliquots bei -20 °C aufbewahrt werden.
Arbeitskonzentration: Zur Anwendung wird Zymolyase typischerweise unmittelbar vor Gebrauch im entsprechenden Arbeitspuffer (z. B. 50 mM Tris-Cl, pH 7,5, 10 mM EDTA, 0,3 % β-Mercaptoethanol) auf die gewünschte Endkonzentration verdünnt.
Die optimale Konzentration hängt von Enzymtyp und Protokoll ab: Für Zymolyase^® 100T: ca. 0,01–0,1 mg/ml; Für Zymolyase^® 20T: ca. 0,05–0,2 mg/ml
Sterilfiltration: Zur Sterilfiltration sollten keine Nitrocellulosefilter verwendet werden - Zymolyase^® kann an Nitrocellulosemembranen adsorbieren.

1 Unit lytische Aktivität entspricht der Enzymmenge, die bei 25 °C eine Abnahme der Absorption bei 800 nm um 30 % bewirkt, unter Verwendung von 6 mg Brauereihefe als Substrat in Phosphatpuffer (pH 7,5). Die lytische Aktivität variiert in Abhängigkeit vom jeweiligen Hefestamm, dem Wachstumsstadium der Hefe und den genauen Kulturbedingungen.

Zymolyase^® 100T wird gewonnen durch Ammoniumsulfat-Fällung und wird durch Affinitätschromatographie zusätzlich aufgereinigt.