Zymolyase^® 100T, 500 mg

Zymolyase^®, fabriquée dans une culture submergée d’Oerskovia xanthineolytica, possède une forte activité lytique pour les parois cellulaires des cellules vivantes d’une multitude de souches de levure. C’est la raison pour laquelle elle est souvent utilisée pour produire des protoplastes ou des sphéroplastes.

L’enzyme principal pour l’activité lytique de Zymolyase^® est β-1,3-glucane-laminaripenta-hydrolase. Cette dernière hydrolyse les polymères linéaires du glucose avec des liaisons β-1,3 et dégage comme produit principal spécifiquement le laminaripentaose.

Autres activités enzymatiques confirmées : β-1,3-glucanase, protéase, mannanase ; parfois des traces d’autres activités hydrolytiques (par ex. amylase, phosphatase).

Stabilité : À 30 °C, 70 % de l’activité lytique est perdue au bout de 3 mois.

Température et pH optimale : pH 7,5 - 35 °C pour la lyse cellules vivantes de la levure, pH 6,5 - 45 °C pour l’hydrolyse du glucane de levure.

Spécificité (spectre lytique) : Ashbya, Candida, Debaryomyces, Eremothecium, Endomyces, Hansenula, Hanseniaspora, Kloeckera, Kluyveromyces, Lipomyces, Metschnikowia, Pichia, Pullularia, Torulopsis, Saccharomyces, Saccharomycopsis, Saccharomycodes, Schwanniomyces, etc.
Solution mère : Comme solution mère, il est possible de préparer une solution Zymolyase^® de 2 ou 10 % (20 ou 100 mg/ml) en fonction du système tampon ultérieur dans l’eau, 10 mM de tampon de phosphate de sodium (pH 7,4) ou 50 mM Tris-Cl (pH 7,5), avec 5 % de glucose et 50 % de glycérine. La Zymolyase^® ne se dissout pas complètement. Ne pas chauffer pour dissoudre mais utiliser la Zymolyase^® comme suspension. La suspension peut être conservée en aliquote à -20 °C.
Concentration de travail : Pour utilisation, la Zymolyase est généralement diluée immédiatement avant emploi dans le tampon de travail approprié (par exemple, Tris-Cl 50 mM, pH 7,5, EDTA 10 mM, β-mercaptoéthanol 0,3 %) à la concentration finale désirée.
La concentration optimale dépend du type d’enzyme et du protocole : Pour Zymolyase^® 100T : environ 0,01–0,1 mg/ml ;Pour Zymolyase^® 20T : environ 0,05–0,2 mg/ml.
Filtration stérile : Pour la filtration stérile, ne pas utiliser de filtres en nitrate de cellulose - la Zymolyase^® peut être adsorbée par les membranes en nitrate de cellulose.

1 unité activité lytique correspond à la quantité d’enzymes qui à 25 °C réduit de 30 % l’absorption à 800 nm, en utilisant 6 mg de levure de bière comme substrat dans un tampon phosphaté (pH 7,5). L’activité lytique varie en fonction de la souche de levure respective, du stade de croissance de la levure et des conditions de culture précises.

Zymolyase^® 100T est obtenue par précipitation de sulfate d’ammonium et est en plus purifiée par chromatographie d’affinité.