ClickTech EdU Cell Proliferation Kit 488 Sensitive

L’azoture-alcyne cycloaddition catalysée par cuivre (I) (CuAAC) est l’exemple le plus important d’un groupe de réactions nommés « réactions click ». Selon la définition de Sharpless, ces réactions sont caractérisées par des rendements élevés, des conditions douces, et par leur tolérance d’une large gamme de groupes fonctionnels.^[1-3] Généralement, les réactions nécessitent une simple ou aucun purification du produit. La caractéristique la plus importante de cette réaction (CuAAC) est son bioorthogonalité unique, car ni azotures, ni alcynes ne sont généralement présents comme groupement fonctionnel dans les systèmes naturels.

Références :
1 H. C. Kolb, M.G. Finn, K. B. Sharpless, Angew. Chem. Int. Ed. 2001, 40, 2004-2021.
2 C.W. Tornoe, C. Christensen, M. Meldal, J. Org. Chem. 2002, 67, 3057-3064.
3 V. V. Rostovtsev, L. G. Green, V. V. Fokin, K. B. Sharpless, Angew. Chem. 2002, 114, 2708-2711; Angew. Chem. Int. Ed. 2002, 41, 2596-2599.

Ces dernières années, la chimie click a pris de l’importance et a connu une popularité sans cesse croissante dans la recherche et le développement. Les raisons en sont, outre la facilité d’utilisation et les rendements élevés, les innombrables possibilités d’application. Carl ROTH vous offre la possibilité d’acquérir le large portefeuille de réactifs click, divers kits pour les essais de prolifération cellulaire basés sur l’EdU et de nombreuses autres applications, de la célèbre marque baseclick. Nous sommes ainsi en mesure de vous proposer un assortiment complet et nécessaire pour la chimie click.

Le chiffre à la fin du nom des kits indique la longueur d’onde à laquelle le colorant fluorescent peut être excité. Comme source d’excitation différents lasers peuvent être utilisés.

Les ClickTech EdU Cell Proliferation Kits pour la détection EdU de la prolifération cellulaire constituent une alternative réfléchie aux tests avec la BrdU, chronophages et moins sensibles. À l’instar des tests avec la BrdU, les tests nécessitent l’incorporation d’un dérivé d’uracile (dans le cas présent de la 2'-désoxy-5-éthynyluridine, abrégée en EdU) dans l’ADN se répliquant. Aucun anticorps n’est utilisé pour détecter les molécules d’EdU. Au lieu de cela, un colorant fluorescent est directement attaché grâce à une réaction click. Cette préparation rapide et élégante permet de marquer directement l’ADN répliqué avec le colorant fluorescent souhaité, et d’adapter ensuite parfaitement la détection à l’équipement du microscope ou à la situation de test (par ex. en cas de détections doubles ou triples). En outre la réaction étant extrêmement sélective, aucun marquage non spécifique ne se produit. Le protocole est composé d’un nombre limité d’étapes et réduit significativement le temps de travail global.

Des kits sont disponibles pour les applications suivantes :

▶ Kits pour la prolifération cellulaire: • Prolifération des cellules T (ClickTech EdU T Cell Proliferation Kit - Flow Cytometry) • Microscopie à fluorescence (ClickTech EdU Cell Proliferation Kit - Imaging) • Criblage à haut débit (ClickTech EdU Cell Proliferation Kit - HTS) • Cytométrie en flux (ClickTech EdU Cell Proliferation Kit - Flow Cytometry)▶ Kits pour la modification des acides nucléiques: • Modification de la PCR • DNA FISH Kit • Kit de marquage de l’ARN • ClickTech Oligo Link Kit • ClickTech Library Kit - full-length mRNA Seq

Fonctionnement de l’essai par chimie click :

Avantages de la méthode basée sur la chimie click :

• Extrêmement fiable
• Facilité d’utilisation
• Procédure de détection rapide (seulement 30 min.)
• Conditions douces, aucune dénaturation de l’ADN requise
• Système modulaire grâce à chimie click
• Compatible avec de nombreux colorants
• Compatible avec multiplexage

La détection de la prolifération cellulaire est très importante pour la surveillance de la vitalité des cellules, la détermination de génotoxicité ou de l’évaluation de médicaments anticancéreux. Les tests de prolifération cellulaire de baseclick avec EdU (5-éthynyl-2'-désoxyuridine) constituent une excellente alternative au test à la BrdU (bromodésoxyuridine). Les essais EdU click de baseclick ne se basent pas sur l’utilisation des anticorps et ne nécessitent donc pas de dénaturer l’ADN pour l’identification des des nucléosides intégrés. L’EdU click utilise par contre, pour la détection, la chimie click avec différents colorants fluorescents. En outre, le protocole de détection réduit et simplifie le nombre total d’étapes et diminue de manière significative le temps de travail total.

Références :
1 S. Vidak et al., Proliferation of progeria cells is enhanced by lamina-associated polypeptide 2α (LAP2α) through expression of extracellular matrix proteins. Genes & Development 2015, 29, 2022-2036.

EdU Click-488 :
2 V. Fock et al., Trophoblast subtype-specific EGFR/ ERBB4 expression correlates with cell cycle progression and hyperplasia in complete hydatidiform moles. Human Reproduction 2015, 30, 4, 789-799.
3 K. Plessl et al., Expression pattern and function of Notch2 in different subtypes of first trimester cytotrophoblast. Placenta 2015, 36, 365-371.
4 G. Meinhardt et al., Wingless ligand 5a is a critical regulator of placental growth and survival. Scientific reports 2016, 6, 28127.
5 V. Ziegler, A. Albers, G. Fritz, Lovastatin protects keratinocytes from DNA damage-related pro-apoptotic stress responses stimulated by anticancer therapeutics. Biochimica et Biophysica Acta 2016, 1863, 1082-1092.

EdU Click-555 :
6 S. Barberán, S. Fraguas and F. Cebrià, The EGFR signaling pathway controls gut progenitor differentiation during planarian regeneration and homeostasis. Development 2016, 143, 2089-2102.
7 M. Hennenberg, et al., Cooperative effects of EGF, FGF, and FGF-ß1 in prostate stromal cells are different from responses to single growth factors. Life Sciences 2015, 123, 18-24.
8 D. Herrmann et al., Honokiol, a constituent of Magnolia species, inhibits adrenergic contraction of human prostate strips and induces stromal cell death. Prostate Int 2014, 2, 3, 140-146.